Современная санитарная микробиология стремится использовать простые, точные и надежные методы. Эти методы направлены на определение общей микробной загрязненности, выявления СПМ и включают: прямой подсчет при микроскопировании микроорганизмов в объекте; методы выделения и идентификации микроорганизмов; биологические методы с использованием лабораторных животных.
Прямой подсчет применяют в экстренных случаях при необходимости срочного ответа о количественном содержании бактерий (например, при авариях в системе водоснабжения, при оценке эффективности работы очистных сооружений и др.). Основной недостаток– невозможность получить точный ответ из-за образования бактериями агломератов или прикрепления к частицам среды. Метод не позволяет отличать живые бактерии от погибших.
Посев на питательные среды проводят для количественного подсчета. На плотных питательных средах подсчитывают число выросших колоний. При этом исходят из предположения, что каждая колония является результатом попадания на среду одной жизнеспособной клетки.
Данный метод неточен, так как выявляет только группы микроорганизмов, растущих на определенных питательных средах при определенной температуре. Невозможно создать унифицированную, подходящую для всех микроорганизмов среду. Не все микроорганизмы, находящиеся в объекте, дают колонии на питательной среде из-за конкуренции и антагонизма.
Содержание числа живых клеток в объекте отражает показатель количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (КМАФАнМ), которое определяется путем подсчета колоний, выросших в агаризованной среде в чашках Петри при температуре (30±1) 0 С в течение (72±3) часов. Это определение регламентировано Международной организацией по стандартизации методов микробиологического анализа (International Standart Organisation, ISO) и ГОСТ 10444.15-94. КМАФАнМ выражается в колониеобразующих единицах (КОЕ) и рассчитывается на 1 г или 1 см 3 образца.
Термин КМАФАнМКОЕ/г (см 3) наиболее полно характеризует определяемую принятыми методами группу микроорганизмов, поэтому в настоящее его используют вместо обозначений, применявшихся ранее (общее количество бактерий, количество сапрофитов, гетеротрофов) в 1 г (см 3), общее микробное число).
Микробиологические показатели безопасности пищевых продуктов для большинства групп микроорганизмов оценивают по альтернативному признаку , т.е. нормируется масса продукта, в которой не допускается присутствие определенных видов микроорганизмов.
Для количественного учета СПМ применяют также две группы методик – определение индекса и титра.
Индекс – количество особей санитарно-показательных микроорганизмов, обнаруженных в определенном объеме или количестве исследуемого объекта (для воды в 1 дм 3 , для почвы, донных отложений и др. – в 1 г).
Титр – это тот наименьший объем исследуемого материала в см 3 или массовое количество в граммах, в котором обнаружена хотя бы одна особь санитарно-показательного организма.
Индекс – величина обратная титру, и наоборот титр – величина обратная индексу.
Микрофлора окружающей среды
Микрофлора воды
Вода является естественной средой обитания разнообразных микроорганизмов. В воде рек, открытых водоемов, морей, океанов обнаруживаются представители всех таксономических групп микроорганизмов – бактерии, вирусы, грибы, простейшие, водоросли. Совокупность всех микроорганизмов, населяющих водоемы, называется микробиальным планктоном.
Микрофлора природных вод в значительной степени зависит от их происхождения. Различают воды: пресные поверхностные – проточные (воды рек, ручьев) и стоячие (воды озер, прудов, водохранилищ); подземные – почвенные, грунтовые, артезианские; атмосферные – дождь, снег; морские . По характеру использования различают воду питьевую (она бывает централизованного водоснабжения и местного, при котором забор ведется из открытых водоемов или подземных источников), воду плавательных бассейнов, лёд хозяйственный. Особого внимания с санитарной точки зрения требуют сточные воды – хозяйственно-фекальные, промышленные, смешанные (хозяйственно-фекальные и промышленные), талые и ливневые, микрофлора которых загрязняет природные воды. С экологической точки зрения всю микрофлору водоемов можно разделить на две группы – автохтонную и аллохтонную.
Автохтонная микрофлора – это микроорганизмы, живущие и размножающиеся в воде. Состав автохтонной микрофлоры незагрязненных водоемов относительно стабилен и характерен для каждого отдельного водоема. Для морей и соленых озер типична галофильная микрофлора, горячих источников – термофильная, северных водоемов – психрофильная. Микробное население воды также отражает состав микрофлоры почвы, с которой вода непосредственно соприкасается. Автохтонная микрофлора играет значительную роль в круговороте веществ в природе, в процессах самоочищения водоемов и поддержания их биологического равновесия.
Аллохтонная микрофлора – это микроорганизмы, приносимые с различными загрязнениями. Среди них встречаются как представители нормальной микрофлоры организма человека и теплокровных животных, так и возбудители различных болезней. Условия водоемов не являются благоприятной средой для размножения аллохтонных микроорганизмов, поэтому они через определенное время отмирают.
Взаимоотношения между автохтонной и аллохтонной микрофлорой в значительной мере определяют эффективность освобождения водоемов от загрязнения их органическими субстратами и патогенными микроорганизмами, т.е. самоочищение водоемов.
Сапробность (гр.sapros – гнилой) – степень загрязнения водоемов органическими веществами. По шкале сапробности различают три зоны – полисапробные, мезосапробные и олигосапробные. Шкала сапробности была предложена в 1908 г. Кольквитцем и Марссоном.
Полисапробные зоны (зоны сильного загрязнения) содержат большое количество органических веществ, которые легко разлагаются и поэтому усваиваются микроорганизмами. В этих зонах почти полностью отсутствует кислород. Микробное население особенно обильно, но число видов ограничено. Микроорганизмы представлены преимущественно анаэробными бактериями, а также грибами и актиномицетами, вызывающими процессы гниения и брожения. Под влиянием этих микроорганизмов сложные органические соединения распадаются на простые с образованием аммиака, сероводорода, диоксида углерода, метана, индола, скатола и др. Число бактерий в 1 см 3 воды в этой зоне достигает миллиона и более. Преимущественно обнаруживаются палочковидные бактерии (до 80% и более).
Мезосапробные зоны (зоны умеренного загрязнения) характеризуются преобладанием окислительных процессов, нитрификацией. Азотсодержащие соединения распадаются до аммиака, который окисляется до нитритов и нитратов. Общее количество микроорганизмов также велико – сотни тысяч в 1 см 3 воды. Качественный состав микрофлоры разнообразен. В основном это нитрифицирующие бактерии, являющиеся облигатными аэробами. Не менее важным является участие водных микроорганизмов в минерализации углеводсодержащих соединений – целлюлозы, лигнина и др. К этим микроорганизмам относятся аэробные и факультативно-анаэробные бактерии родов Pseudomonas, Mycobacterium, Flavobacterium , грибы родов Streptomyces, Candida и другие, а также анаэробные бактерии рода Clostridium .
Олигосапробные зоны (зоны чистой воды) характеризуются окончанием процесса самоочищения и небольшим количеством органических веществ. Минерализация органического вещества заканчивается. Видовой состав микрофлоры приближается к обычной автохтонной флоре. Количество микроорганизмов в 1 см 3 воды исчисляется десятками, реже сотнями. В чистых водах преобладают кокки (до 80% и более).
Процессы самоочищения воды в водоемах происходят последовательно и непрерывно, характеризуясь постепенной сменой биоценозов. На процессы самоочищения влияет целый ряд факторов: разбавление загрязненных вод чистыми, прозрачность воды, температура, оседание загрязненных частиц, наличие химических веществ, симбиотические и антагонистические взаимоотношения в водных биоценозах.
Микрофлора почвы
Почва является главным резервуаром и естественной средой обитания микроорганизмов в природе. Почва формируется на разрушающихся под действием климатических условий горных породах при участии органических соединений, образуемых в результате разложения растительных и животных организмов. Почвенные микроорганизмы принимают активное участие в процессах формирования и самоочищения почвы, а также в круговороте веществ в природе.
Количественный состав микрофлоры почвы зависит от ее структуры, содержания органических и минеральных соединений, а также влажности, кислотности, аэрации, температуры и других факторов. Число микроорганизмов в 1 г почвы может достигать нескольких миллиардов. Больше всего их находится в унавоженной, подвергающейся обработке почве, меньше – в песках. Количество микроорганизмов подвержено сезонным колебаниям – весной микробное население увеличивается, достигая максимума к лету, в разгар лета уменьшается (в результате наиболее активного воздействия солнечных лучей) осенью опять увеличивается, и снижается зимой. Распределение микроорганизмов по глубине также неравномерно. На поверхности в слое толщиной 1-2 мм относительно мало микроорганизмов из-за влияния ультрафиолетового облучения. Наиболее обильна микрофлора в слое на глубине 10-20 см, где протекают основные биохимические процессы. В более глубоких почвенных слоях микрофлора становится более скудной, и на глубине 4-5 м обнаруживается уже очень мало микроорганизмов.
Качественный состав микрофлоры почвы очень разнообразен. В составе микрофлоры почвы можно выделить различные физиологические группы микроорганизмов, которые участвуют в различных процессах на разных этапах постепенного разложения органических веществ. 1) Микроорганизмы-аммонификаторы, которые вызывают гниение остатков растений, трупов животных, разложение мочевины. 2) Нитрифицирующие бактерии, которые обладают способностью окислять аммиак до азотистой кислоты, образуя нитриты. 3) Микроорганизмы, расщепляющие клетчатку, вызывающие различные виды брожений. 5) Бактерии, участвующие в круговороте серы, фосфора, серы и других элементов.
С выделениями человека и животных, с различными хозяйственно-бытовыми и промышленными стоками в почву попадает громадное количество разнообразных микроорганизмов, в том числе и патогенных. Среди патогенных микроорганизмов можно выделить три группы. 1) патогенные микроорганизмы, постоянно обитающие в почве. К ним относится небольшое количество микроорганизмов. Особого внимания среди них заслуживают клостридии ботулизма, которые попадают в почву с испражнениями человека и животных, образуют споры, остаются в почве долгое время. 2) Спорообразующие патогенные микроорганизмы (бациллы сибирской язвы, клостридии столбняка и газовой гангрены), для которых почва является вторичным резервуаром. При благоприятных условиях эти микроорганизмы могут размножаться в почве и сохраняться в виде спор длительное время. 3) Патогенные микроорганизмы, попадающие в почву с выделениями человека и животных, сохраняющиеся в ней в течение нескольких недель или месяцев. Эти микроорганизмы (сальмонеллы, шигеллы, вибрионы, микобактерии, лептоспиры, бруцеллы и др.) не образуют спор и поэтому быстро гибнут в результате воздействия различных физических и биологических факторов.
Естественные биохимические процессы, происходящие под воздействием микроорганизмов, обуславливают самоочищение и обезвреживание почвы. При правильном управлении такими процессами опасность передачи инфекционных болезней через почву может быть сведена к минимуму.
Микрофлора воздуха
Воздух не является естественной средой обитания микроорганизмов, но играет большую роль в их распространении. Микроорганизмы попадают в воздух из почвы, воды, из организма человека и различных животных. В большинстве случаев эти микроорганизмы не способны размножаться в связи с отсутствием питательных веществ и недостатком влаги.
Источником загрязнения атмосферного воздуха микроорганизмами является в основном почва. На микрофлору атмосферного воздуха оказывают влияние солнечные лучи, колебания температуры, скорость ветра, атмосферные осадки, наличие зеленых насаждений. Микрофлора атмосферного воздуха преимущественно сапрофитная. В атмосферном воздухе микроорганизмов больше летом (особенно в сухую погоду) и меньше зимой.
Обсемененность микроорганизмами воздуха закрытых помещений всегда превышает обсемененность атмосферного воздуха. Это касается также патогенной микрофлоры, которая может попадать от больных людей, животных и микробоносителей. В закрытых помещениях микрофлора воздуха более обильна зимой, что связано с меньшей возможностью проветривания. Контаминация воздуха микроорганизмами происходит в основном капельным путем – при разговоре, кашле, чиханье. Возможно также попадание микроорганизмов со слущиваюшимся эпидермисом кожных покровов, с пылью загрязненных объектов.
В основе воздушно-капельного и воздушно-пылевого механизма передачи инфекционных болезней лежит теория аэрозоля. Аэрозоль представляет собой коллоидную систему, состоящую из воздуха, капелек жидкости или частиц твердого вещества, включающих значительное количество микроорганизмов. Такой аэрозоль выделяет каждый человек или животное при дыхании, кашле и т.п. Размер капелек аэрозоля может быть различным – от 10-100 до 2000 нм. В зависимости от размера капелей, их электрического заряда, скорости движения в воздухе различают капельную, пылевую фазы аэрозоля и капельные ядрышки. Капельная фаза аэрозоля характеризуется присутствием в воздухе мелких капель, длительно в нем удерживающихся и высыхающих прежде, чем они успевают осесть. Крупные капли аэрозоля быстро оседают под действием силы тяжести и высыхают, образуя пыль, которая при определенных условиях поднимается в воздушную среду – это пылевая фаза аэрозоля. Мелкие капельки аэрозоля (до 100 нм) высыхая, остаются в воздухе во взвешенном состоянии и образуют устойчивую аэродисперсную систему – капельные ядрышки , которые могут переноситься на значительные расстояния. В капельных ядрышках частично сохраняется влага, что обуславливает жизнеспособность в них микроорганизмов. Наибольшую опасность для здоровья представляют микроорганизмы в мелких частицах (до 100 нм), которые способны проникать глубоко в альвеолы легких, преодолевая защитные барьеры верхних дыхательных путей.
Пищевые заболевания
ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ОБРАЗОВАНИЮ
Государственное образовательное учреждение
высшего профессионального образования
«ПЕНЗЕНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ» (ПГУ)
Основы санитарной микробиологии
Учебно-методическое пособие для студентов медицинских вузов
Методическое пособие подготовлено на кафедре микробиологии, эпидемиологии и инфекционных болезней медицинского института ПГУ.
Пособие составлено в соответствии с программой по микробиологии, вирусологии для студентов медицинских вузов.
Изложены задачи и методы санитарной микробиологии. Приведены методы санитарно-микробиологического обследования объектов, актуальных в плане возникновения и распространения инфекций
Список сокращений. 4
1. Задачи санитарной микробиологии. 5
2. Методы санитарной микробиологии. 6
2.1. Понятие о санитарно-показательных микроорганизмах. 7
2.2. Характеристика основных групп СПМ.. 9
2.3. Косвенные показатели загрязнения. 11
3. Принципы санитарно-микробиологических исследований. 14
4. Санитарно-микробиологическое исследование воздуха. 16
4.1. Микрофлора воздуха. 16
4.2. Исследование воздуха. 18
5. Санитарно-микробиологическое исследование воды. 27
5.1. Микрофлора воды. 27
5.2. Исследование воды.. 28
6. Санитарно-микробиологическое исследование почвы. 52
6.1. Микрофлора почвы. 52
6.2. Исследование почвы. 54
7. Санитарный режим лечебно-профилактических учреждений. 60
7.1. Организация дезинфекционных и стерилизационных мероприятий в лечебно-профилактических организациях (ЛПО). 62
7.2. Санитарно-микробиологическое исследование оборудования, рук и спецодежды персонала. 85
7.3. Санитарно-бактериологическое исследование перевязочного, шовного и другого хирургического материала. 87
7.4. Исследование на носительство золотистого стафилококка. 88
8. Санитарно-микробиологическое исследование пищевых продуктов. 89
8.1. Микрофлора пищевых продуктов. 89
8.2. Исследование пищевых продуктов. 90
8.3. Санитарно микробиологическое исследование молока и молочных продуктов 96
Список литературы. 103
Список сокращений
СПМ - санитарно-показательные микроорганизмы
БГКП - бактерии группы кишечной палочки
ВБИ - внутрибольничные инфекции
КМАФАМ – количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов
КОЕ - колониеобразующие единицы
ЛПО – лечебно-профилактические организации
ЛПУ – лечебно-профилактические учреждения
ЛКП - лактозоположительные кишечные палочки
ОМЧ – общее микробное число
МАФАМ или МАФАнМ – мезофильные аэробные и факультативно-анаэробные микроорганизмы
МПА – мясо-пептонный агар
ОЧС – общее число сапрофитов
ТКБ - термотолерантные колиформные бактерии
1. Задачи санитарной микробиологии.
Санитарная микробиология – медико-биологическая наука, исследующая закономерности существования потенциально опасных для человека микроорганизмов в окружающей среде и обусловливаемые ими процессы, которые могут непосредственно или косвенно оказывать вредное влияние на здоровье людей.
Санитарная микробиология относится к группе профилактических наук и находится на стыке микробиологии, гигиены и эпидемиологии.
Объектами изучения санитарной микробиологии являются:
· потенциально патогенные и санитарно-показательные микроорганизмы внешней среды,
· физические, химические и биологические факторы внешней среды, способствующие или препятствующие существованию этих групп микроорганизмов во внешней среде и их проникновению в организм человека.
Важнейшими задачами санитарной микробиологии являются:
1) изучение закономерностей взаимообмена (круговорота) потенциально опасных для человека микробов между микропопуляциями людей, животных и совокупностью объектов окружающей среды, включая условия существования микробов в этих трех средах;
2) поиск и использование микробиологических методов оценки безопасности для человека пищевых продуктов, воды, воздуха и разнообразных предметов и материалов;
3) разработка нормативов, устанавливающих соответствие качественного и количественного состава микрофлоры конкретных объектов внешней среды гигиеническим требованиям;
4) оценка путей воздействия человека и животных на окружающую среду. В результате промышленной и индивидуальной деятельности людей происходит контаминация объектов окружающей среды патогенными микроорганизмами, при этом особое внимание уделяется изучению нарушений процессов самоочищения воды, почвы;
2. Методы санитарной микробиологии
Методы, используемые в санитарной микробиологии, можно разделить на 2 группы: прямые и косвенные.
Прямые методы предполагают непосредственное обнаружение возбудителей инфекционных болезней или их токсинов в объектах окружающей среды.
Для определения патогенных микроорганизмов могут быть использованы следующие методы:
Прямой посев исследуемого материала на питательные среды;
Предварительная концентрация патогенных микроорганизмов пропусканием исследуемого объекта (жидкой консистенции) через мембранные фильтры или посевом в среды накопления;
Обнаружение патогенных микроорганизмов методом заражения чувствительных животных (биопроба);
Применение ускоренных методов: серологических, иммунолюминисцентного и радиоиммунного анализов.
Методы прямого обнаружения - наиболее точные и надёжные критерии оценки эпидемиологической опасности внешней среды. Несмотря на то, что в настоящее время разработаны методы прямого, ускоренного и количественного определения потенциально патогенных микробов, данный метод имеет целый ряд недостатков. К ним относятся следующие:
· патогенные микроорганизмы находятся в окружающей среде непостоянно - сравнительно легко их можно обнаружить в период эпидемии той или иной инфекции, но очень трудно - в межэпидемические периоды. Основная же деятельность санитарных микробиологов направлена на предупреждение возникновения эпидемий и поэтому вся работа ведется в межэпидемические периоды;
· концентрация патогенных микроорганизмов в окружающей среде значительно уступает непатогенным и распространение их в объектах неравномерно;
· при выделении патогенных микроорганизмов методами культивирования на питательные среды, даже ингибиторные, они неизбежно страдают от конкуренции сапрофитной флоры.
В связи с вышеизложенным получаемые отрицательные результаты прямого определения патогенных микроорганизмов в объектах окружающей среды еще не говорят с достоверностью об их отсутствии.
Косвенные методы предполагают определение общего числа микробов и обнаружение санитарно-показательных микроорганизмов (СПМ).
2.1. Понятие о санитарно-показательных микроорганизмах
Микроорганизмы, обитающие в кишечнике или в верхнем отделе дыхательных путей человека и животных и постоянно выделяющиеся окружающую среду, называются санитарно - показательными .
По количеству СПМ можно косвенно судить о возможном присутствии патогенов во внешней среде. То есть при их определении исходят из предположения, что чем больше объект загрязнен выделениями человека и животных, тем больше будет СПМ и тем вероятнее присутствие патогенов.
Основные требования, предъявляемые к санитарно-показательным микроорганизмам, следующие:
1) постоянное обитание в естественных полостях организма человека и животных (которые являются их единственной природной средой обитания - биотопом) и выделение их в большом количестве в окружающую среду;
2) продолжительность выживания их в окружающей среде должна быть такой же или большей, чем патогенных микроорганизмов, выводимых из организма теми же путями;
3) не должны размножаться в окружающей среде;
4) не должны сколько-нибудь значительно изменять свои биологические свойства при попадании в окружающую среду;
5) должны быть достаточно типичными, с тем, чтобы их дифференциальная диагностика осуществлялась без особого труда;
6) индикация, идентификация и количественный учет должны производиться современными, простыми, легко доступными и экономичными микробиологическими методами.
Все санитарно-показательные микроорганизмы являются индикаторами биологического загрязнения. Выделяют несколько групп микроорганизмов, обнаружение которых в объектах окружающей среды говорит о различных видах загрязнения. Но между группами СПМ нет четких границ, так как некоторые микроорганизмы являются показателями различных видов загрязнения.
Читайте также:
|
При проведении санитарно-микробиологических исследований необходимо выполнять следующие требования.
1. Правильный отбор проб
Его проводят с соблюдением всех необходимых правил асептики; при хранении и транспортировке необходимо исключить возможность гибели и дополнительного размножения микроорганизмов. При невозможности немедленно сделать анализ материал хранят не более 6-8 часов.
2. Серийность проводимых анализов
Микроорганизмы в объектах окружающей среды распределены крайне неравномерно. Для получения адекватных результатов проводят отбор серии проб из разных участков объекта. При проведении анализов все образцы смешивают и отбирают среднюю пробу.
3. Повторность отбора проб
Для получения сопоставимых результатов осуществляют повторный отбор проб в связи с тем, что в исследуемых образцах состав микробиоты меняется достаточно быстро.
4. Применение стандартных методов исследования
Использование методик, утвержденных ГОСТ, позволяет получать в разных лабораториях сопоставимые результаты.
5. Использование комплекса тестов
Необходимо для получения адекватной информации при сочетании прямых и косвенных методов выявления микроорганизмов с учетом влияния факторов внешней среды и собственной микробиоты объекта.
Микробиологические основы ХАССП...
Глава 4. Источники и пути микробной контаминации.
Современная санитарная микробиология стремится использовать простые, точные и надежные методы. Они направлены на определение общей микробной загрязненности, выявления СПМ и включают:
Прямой подсчет при микроскопии микроорганизмов в объекте;
Методы выделения и идентификации микроорганизмов;
■- биологические методы с использованием лабораторных животных.
Прямой подсчет применяют в экстренных случаях при необходимости срочного ответа о количественном содержании бактерий (например, при авариях в системе водоснабжения, при оценке эффективности работы очистных сооружений и др.). Основной недостаток - невозможность получить точный ответ из-за образования бактериями агломератов или прикрепления к частицам среды. Метод не позволяет отличать живые бактерии от погибших.
Посев на питательные среды производят для количественного подсчета. На плотных питательных средах подсчитывают число выросших колоний. При этом исходят из предположения, что каждая колония является результатом попадания на среду одной жизнеспособной клетки. Данный метод неточен, так как выявляет только группы микроорганизмов, растущих на определенных питательных средах при определенной температуре. Невозможно создать унифицированную, подходящую для всех микроорганизмов среду. Не все микроорганизмы, находящиеся в объекте, дают колонии на питательной среде из-за конкуренции и антагонизма.
Содержание числа живых клеток в объекте отражает показатель количества мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов (КМАФАМ), которое определяется путем подсчета колоний, выросших в агаризованной среде в чашках Петри при температуре 30±1°С в течение 3 дней (72±3). Это определение регламентировано Международной организацией по стандартизации методов микробиологического анализа (International Standart Organisation, ISO) и ГОСТ 10444.15-94. КМАФАМ выражается в колониеобразую-щих единицах (КОЕ) и рассчитывается на 1 г (см 3) образца.
Термин КМАФАМ КОЕ/г (см 3) наиболее полно характеризует определяемую принятыми методами группу микроорганизмов, поэтому в настоящее время его используют вместо обозначений, применявшихся ранее (общее количество бактерий, количество сапротрофов, гетеротрофов в 1 г (см 3), общее микробное число).
Микробиологические показатели безопасности пищевых продуктов для большинства групп микроорганизмов оценивают по альтернативному принципу, то есть нормируется масса продукта, в которой не допускается присутствие определенных видов микроорганизмов.
Принципы, которыми руководствуются при санитарно-микробиологических исследованиях, исходят из основной задачи, разрешаемой ими: определение возможности присутствия в исследуемом объекте патогенных микроорганизмов или токсинов, образующихся в результате жизнедеятельности; обнаружение и оценка степени порчи изучаемого объекта (особенно пищевых продуктов).
Первым принципом является правильное взятие проб для санитарно-микробиологических исследований с соблюдением всех необходимых условий, регламентированных для каждого исследуемого объекта, правил стерильности.
Второй принцип - проведение серийных анализов. Серию проб берут из разных участков исследуемого объекта, что позволит получить более достоверную характеристику объекта. Доставленные в лабораторию пробы смешивают, затем точно отмеряют необходимое количество материала - среднее по отношению к исследуемому материалу в целом.
Третий принцип - повторное взятие проб (получение сопоставимых результатов).
Четвертый принцип - применение стандартных и унифицированных методов исследования, утвержденных соответствующими ГОСТами и инструкциями. Это позволяет в различных лабораториях получать сравнимые результаты.
Пятый принцип - одновременное использование комплекса тестов при оценке исследуемых объектов для получения разносторонней санитарно-микробиологической характеристики.
Шестой принцип - проведении оценки исследуемых объектов по совокупности полученных результатов, полученных при использовании санитарно-микробиологических тестов с учетом других гигиенических показателей, указанных в соответствующих ГОСТах и нормативах (органолептических, химических, физических и т. д.).
Седьмой принцип - ответственность сотрудников санитарной службы за точность обоснования выводов и заключений о состоянии исследуемых объектов.
Для большей объективности оценки получаемых результатов врачи пользуются специальными инструкциями, нормативами, ГОСТами, разработанными профильными санитарно-микробиологическими учреждениями и утвержденными Министерством здравоохранения и социального развития РФ. Эти стандарты периодически пересматриваются и приводятся в соответствие с изменениями, которые вытекают из практического опыта, материальных возможностей, современного уровня знаний и развития техники.
Методы санитарно-микробиологических исследований
Санитарная микробиология при индикации и идентификации санитарно-показательных, патогенных микроорганизмов, при определении общей микробной обсемененности объектов окружающей среды использует методы, которые применяются в диагностических микробиологических лабораториях:
- - микроскопической (при индикации и прямом подсчете микроорганизмов в исследуемом объекте);
- - бактериологический - выделение микроорганизмов и их идентификация;
- - биологический - заражение чувствительных животных;
- - ускоренные (инструментальные) методы (реакция иммунофлюоресценции, радиоизотопный метод и др.).
Комплекс тестов, используемых для разносторонней и полноценной санитарно-микробиологической характеристики объектов окружающей среды:
- - определение количества аэробных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (КМАФАнМ);
- - определение и титрование санитарно-показательных микроорганизмов;
- - индикация в исследуемых объектах патогенных микроорганизмов и их токсинов;
- - определение степени микробной порчи изучаемых объектов или продуктов.
Существует два метода определения КМАФАнМ:
- - метод прямого подсчета (в счетных камерах Горяева или в камерах, для счета бактерий, на мембранных фильтрах, через которые пропускают исследуемую жидкость или взвесь);
- - метод количественного посева различных разведений образцов и проб исследуемого объекта на плотные питательные.
Выявляются лишь мезофильные, аэробные или факультативно-анаэробные бактерии.
Оба метода являются относительными, приблизительными. Для получения сравнимых результатов определение общего микробного числа исследуемых объектов проводится по стандартным, конкретным для каждого случая методикам, регламентированным соответствующими ГОСТами.
(предусматривают определение общей микробной обсеменённости (ОМЧ), определение и титрование санитарно-показательных микроорганизмов).
Санитарно-микробиологическое состояние воздуха закрытых помещений оценивают по общему микробному числу (ОМЧ) – количеству особей, обнаруживаемых в 1 м 3 воздуха, наличию санитарно-показательных бактерий: гемолитических стрептококков, золотистых стафилококков, а также дрожжевых и плесневых грибов.
Согласно СанПиН 2.1.3.1375-03, воздушная среда помещений лечебных учреждений и аптек по уровню бактериальной обсемененности разделена на 4 класса.
Микробиологические показатели для оценки воздушной среды аптечных учреждений можно определить путем посева воздуха седиментационным (по Коху) или аспирационным методом (в аппарате Кротова).
Допустимые уровни бактериальной обсеменённости воздушной среды помещений лечебных учреждений в зависимости от их
функционального назначения и класса чистоты
| Класс чистоты | Название помещений | Санитарно-микробиологические показатели | |||||
| общее количество микроорганизмов в 1 м 3 воздуха (КОЕ/м 3) | количество колоний S.aureus в 1 м 3 воздуха (КОЕ/м 3) | количество плесневых и дрожжевых грибов в 1 дм 3 воздуха | |||||
| До начала | Во время работы | До начала | Во время работы | До начала | Во время работы | ||
| Особо чистые(А) | Операционные, родильный зал, асептические боксы для гематологических, ожоговых больных, палата для недоношенных, асептический блок аптек, стерилизационные (чистая половина) боксы бактериологических лабораторий | не более200 | не более500 | не должно быть | не должно быть | не должно быть | не должно быть |
| Чистые(Б) | Процедурные, перевязочные, предоперационные, палаты реанимации, залы реанимации, детские палаты, комнаты сбора и пастеризации грудного молока, ассистентские и фасовочные аптек, дистилляторная,помещения бактериологических и клинических лабораторий, предназначенные для исследований | не более500 | не более750 | не должно быть | не должно быть | не должно быть | не должно быть |
| Условно чистые(В) | Палаты хирургических отделений; коридоры, примыкающие к операционным и родильным залам; смотровые, боксы и палаты инфекционных отделений, ординаторские, материальные, кладовые чистого белья | не более750 | не более1000 | не должно быть | не более2 | не должно быть | не должно быть |
| Грязные (Г) | Коридоры и помещения административных зданий, лестницы, лечебно-диагностические, санитарные комнаты, туалеты, комнаты грязного белья | Не нормируются |
Седиментационный метод (по Коху) – оседание микробов под действием силы тяжести - является простым способом изучения микрофлоры воздуха. Он заключается в том, что чашки Петри со средой оставляют открытыми на определённое время (5-10 минут на общую обсеменённость и не менее 40 минут на кокковую микрофлору), затем их закрывают, маркируют и выдерживают 24 часа в термостате и 24 часа при комнатной температуре. Количество выросших колоний соответствует степени загрязнённости воздуха: по приблизительному подсчёту на площадь 100 см 2 в течение 5 минут оседает столько микробов, сколько их содержится в 10 л воздуха.
Аспирационный метод – более точный количественный метод определения микробного числа воздуха. Посев воздуха осуществляется с помощью приборов. Аппарат Кротова устроен таким образом, что воздух с заданной скоростью просасывается через узкую щель плексигласовой пластины, закрывающей чашку Петри с питательным агаром. При этом частицы аэрозоля с содержащимися на них микроорганизмами равномерно фиксируются на всей поверхности среды благодаря постоянному вращению чашки под входной щелью.
После инкубации посева в термостате проводят расчет микробного числа по формуле:
| ОМЧ | = | N ∙ 1000 |
| V |
где N – количество выросших на чашке колоний;
V – объём пропущенного через прибор воздуха, дм 3 ;
1000 - искомый объём воздуха, дм 3 .
Наличие санитарно-показательных для воздуха микроорганизмов – золотистого стафилококка, гемолитического стрептококка, плесневых грибов, кандид – определяют по характеру выросших колоний на специальных средах (желточно-солевом агаре, кровяном агаре, среде Сабуро) и при микроскопическом изучении бактерий из этих колоний.
Контрольные вопросы.
Каковы особенности ферментных систем бактерий? Виды ферментов: по их действию; по выделению в окружающую среду; конститутивные и адаптивные ферменты. Какое практическое значение имеет изучение ферментативной активности бактерий? Методы изучения протеолитической и сахаролитической активности бактерий. Дифференциально-диагностические среды: перечислите, назовите основные составные части и применение. На какое изменение среды реагирует индикатор в этих средах? По какому признаку дифференцируются бактерии на средах Эндо, Левина, Плоскирева? Каким свойством должны обладать бактерии, чтобы образовать на этих средах окрашенные колонии? Если бактерии образуют бесцветные колонии, что это значит? Среды Гисса, их состав и применение. Что такое «пёстрый» или «цветной» ряд? Среда Олькеницкого, как производится посев и как отмечают на этой среде ферментативные свойства бактерий? Методы определения протеолитической активности бактерий: разжижение желатина, образование индола, сероводорода, аммиака. Что представляют собой микротестсистемы для определения ферментативной активности бактерий: как производят посев и как учитывают результаты? Что такое СИБ, как используется эта система, как производится посев и учёт результатов?Микрофлора воздуха: какие микробы чаще всего встречаются, как меняется микрофлора в зависимости от условий. Что такое микробное число воздуха, какими методами оно определяется? Что такое санитарно-показательные микроорганизмы? Какие микробы считаются санитарно-показательными для воздуха? Какие патогенные микробы могут передаваться через воздух?Определите понятия: нормальная микрофлора организма человека; постоянная микрофлора; транзиторные микроорганизмы; потенциально опасные микроорганизмы. Назовите органы и ткани, свободные от постоянной микрофлоры. Какие микробы относятся к постоянной микрофлоре полости рта и какое значение имеют в норме и патологии? Характеристика микрофлоры различных областей организма: полости рта, желудочно-кишечного тракта, органов дыхания. Значение нормальной микрофлоры - положительное и отрицательное. Что такое дисбактериоз, в чём он выражается, причины его возникновения и способы предупреждения и устранения. Назовите препараты, применяемые для устранения дисбактериоза, что они содержат, как применяются, что с ними происходит в организме человека.
